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本法系比較肝素標準品(S)與供試品(T)延長新鮮兔血或兔、豬血漿凝結時間的作用，以測定供試品的效價。

標準品溶液的配制

精密稱取肝素標準品適量，按標示效價加滅菌水溶解使成每1ml中含100單位的溶液，分裝于適宜的容器內，4～8℃貯存，如無沉淀析出，可在3個月內使用。

標準品稀釋液的配制

試驗當日，精密量取標準品溶液，按高、中、低劑量組(ds<[3]>、ds<[2]>、ds<[1]>)用 0.9%氯化鈉溶液配成三種濃度的稀釋液，相鄰兩濃度的比值(r)應相等。調節劑量使低劑量組各管的平均凝結時間較不加肝素對照管組明顯延長。高劑量組各管的平均凝結時間，用新鮮兔血者，以不超過60分鐘為宜，其稀釋液一般可配成每1ml中含肝素2～5單位，r為1：0.7左右;用血漿者，以不超過30分鐘為宜，其稀釋液一般可配成每1ml中含肝素0.5～1.5單位，r為1∶0.85左右。

供試品溶液與稀釋液的配制

按供試品的標示量或估計效價(A<[T]>)，照標準品溶液與稀釋液的配制法配成高、中、低(dT<[3]>、dT<[2]>、 dT<[1]>)三種濃度的稀釋液。相鄰兩濃度之比值(r)應與標準品相等，供試品與標準品各劑量組的凝結時間應相近。

血漿的制備

迅速收集兔或豬血置預先放有8%枸櫞酸鈉溶液的容器中，枸櫞酸鈉溶液與血液容積之比為1：19，邊收集邊輕輕振搖，混勻，迅速離心約20分鐘(離心力不超過1500×g為宜，g為重力常數)。立即分出血漿，分成若干份分裝于適宜容器內，低溫凍結貯存。臨用時置37±0.5℃水浴中融化，用兩層紗布或快速濾紙過濾，使用過程中在4～8℃放置。

檢定法

(1)新鮮兔血

取管徑均勻(0.8×3.8cm或1.0×7.5cm)、清潔干燥的小試管若干支，每管加入一種濃度的標準品或供試品稀釋液0.1ml，每種濃度不得少于3管，各濃度的試管支數相等。取剛抽出的兔血適量，分別注入小試管內，每管0.9ml，立即混勻，避免產生氣泡，并開始計算時間。將小試管置37±0.5℃恒溫水浴中，從動物采血時起至小試管放入恒溫水浴的時間不得超過 3分鐘，注意觀察并記錄各管的凝結時間。

(2)血漿

取上述規格的小試管若干支，分別加入血漿一定量，置37±0.5℃恒溫水浴中預熱5～10分鐘后，依次每管加入一種濃度的標準品或供試品稀釋液及1%氯化鈣溶液(每種濃度不得少于3管，各濃度的試管支數相等)，血漿、肝素稀釋液和氯化鈣溶液的加入量分別為0.5、0.4和0.1ml(或0.8、0.1和0.1ml)，加入氯化鈣溶液后，立即混勻，避免產生氣泡，并開始計算時間，注意觀察并記錄各管凝結時間。將各管凝結時間換算成對數，照生物檢定統計法(附錄ⅩⅣ)中的量反應平行線測定法計算效價及實驗誤差。

檢定法(1)的可信限率(FL%)不得大于10%。

檢定法(2)的可信限率(FL%)不得大于5%。

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（責任編輯：中大編輯）

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